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Outils personnels

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Mutagénèse

 

 

Environnement et mutations.

 
OBJECTIFS
Objectifs notionnels :

Certains agents de l’environnement peuvent augmenter le taux de mutation

Objectifs méthodologiques :

Concevoir un protocole ; réaliser techniquement en suivant un protocole ; saisir les résultats par lecture de graphes ; adopter une démarche explicative.
MANIPULATIONS
Principe :

Evaluer le taux de mutation dans une population de levures exposée à des doses croissantes d’UV.

Matériel indispensable :
  • boîtes de Pétri avec milieu de culture (cf kit Sordalab)
  • levure de boulanger
  • tampon phosphate pH 5.6
  • eau distillée stérile
  • étaleur
  • agitateur magnétiquelampe UV
 
Réalisation technique :

* Préparer la veille la suspension de levures :

  • suspension 1g.L-1 dans le tampon en agitation pendant 3heures. 
  • Prélever 1 ml de la suspension et diluer dans 9 mL d’eau distillée. 
  • Reprendre 1 mL et refaire une dilution de 1/10.
* Par binôme :
  • Prélever 0,2 mL de la dilution et déposer sur la gélose, étaler sur toute la surface, refermer la boîte.
  • Exposer les boîtes aux UV (entre 1 et 5mn)
  • Laisser incuber 7 jours à température ambiante.
 
* Résultats :

Dans les boîtes exposées plus longtemps aux UV, on voit apparaître des colonies à l’aspect gélatineux et de taille variable (taille plus petite)

TRUCS, ASTUCES, DIFFICULTES POSSIBLES

Prix minimum pour cette manipulation.

Augmenter la dilution si le repiquage est réalisé avant des vacances

 

 

Mutations des cellules de levures.

 
OBJECTIFS
Objectifs notionnels :

Certains agents de l'environnement peuvent augmenter le taux de mutations.

Objectifs méthodologiques :

Concevoir un protocole ; réaliser techniquement.
MANIPULATIONS
Matériel indispensable :
Kit Sordalab constitué :
  • De milieux de culture ( déjà coulés dans des boites de Pétri ou à couler )
  • D'une souche de levures présentant une couleur rouge ( blocage de la synthèse de pigments de la chaîne respiratoire )
  • Etaleurs stériles
  • Bec électrique
  • Différents récipients stériles permettant de réaliser des dilutions.
  • Pipettes stériles
  • Lampe UV
  • Chronomètre
Réalisation technique :
A préparer avant la séance
  • Prélèvement de levures présentant le caractère "couleur rouge".
  • Mise en solution en milieu stérile ( autour du bec électrique )
  • Comptage sur lame de Kova.
  • Correction de la concentration par dilution suivant les indications du protocole
Lors de la première séance
  • Les élèves réalisent une dernière dilution en milieu stérile
  • Ensemencement de 5 boites de Pétri en milieu stérile
  • Exposition aux UV : 0 s ( témoin ), 15 s, 30 s, 1 min et 2 min.
  • Mise en culture 4 jours à 35 °C puis conservation au froid à 3°C jusqu'au jour du TP.
Lors de la deuxième séance
  • Comptage des colonies è Apparition de colonies blanches
  • Calcul du rapport nombre de colonies rouges / nombre de colonies blanches.

TRUCS, ASTUCES, DIFFICULTES POSSIBLES

On peut donner aux élèves directement la solution à la concentration voulue et ainsi éviter la dernière dilution pour gagner du temps.

Pour connaître les zones de stérilité autour du bec électrique voir le site académique : Zones de stérilité

Attention aux UV qui présentent un danger, il faut fournir des gants aux élèves et mettre la lampe sous un cache.

Plus la durée d'exposition augmente et plus la létalité des cellules de levure augmente, c'est pour cette raison qu'il faut calculer le rapport nombre de colonies rouges/ nombre de colonies blanches.